引言

開學(xué)以來，陸續(xù)收到細(xì)胞群（QQ:386500167)里關(guān)于細(xì)胞凋亡的咨詢，情形很類似，大概原代細(xì)胞剛開始培養(yǎng)不錯(cuò)，但在1-2天內(nèi)發(fā)生大面積凋亡。 今天從鉀離子過高的角度，詳細(xì)解釋下導(dǎo)致這種“延遲性"的凋亡，并提供一套完整的排查思路和解決方案，供大家參考！

為什么鉀離子過高會(huì)導(dǎo)致“延遲性"大面積凋亡？

原代細(xì)胞不像永生化細(xì)胞系那樣耐受性強(qiáng)，它們對微環(huán)境的變化極其敏感。鉀離子的影響不是像消毒劑那樣瞬間殺滅，而是通過破壞細(xì)胞的基本穩(wěn)態(tài)，最終觸發(fā)凋亡程序。這個(gè)過程需要時(shí)間，從而表現(xiàn)為“延遲"。

1. 滲透壓應(yīng)激的累積效應(yīng)

高鉀離子意味著高滲透壓。細(xì)胞在高滲環(huán)境中會(huì)持續(xù)失水，體積收縮。雖然細(xì)胞有短期的容積調(diào)節(jié)機(jī)制，但持續(xù)的滲透壓應(yīng)激會(huì)耗盡細(xì)胞的能量，并激活應(yīng)激信號通路，最終走向凋亡。

2. 膜電位去極化與代謝紊亂

細(xì)胞外高鉀會(huì)持續(xù)使膜電位去極化。這就像讓一個(gè)電器長期在錯(cuò)誤的電壓下工作。它會(huì)擾亂：

這個(gè)過程是漸進(jìn)性的，當(dāng)代謝紊亂累積到一定程度，細(xì)胞就會(huì)啟動(dòng)程序性死亡。

3. 競爭性抑制的后果顯現(xiàn)

高濃度K?會(huì)競爭性抑制細(xì)胞對Mg2?（鎂） 和Ca2?（鈣） 的吸收。Mg2?是數(shù)百種酶的輔因子，參與所有與ATP相關(guān)的反應(yīng)和DNA復(fù)制。這種“隱性饑餓"在細(xì)胞嘗試進(jìn)行第一次分裂或執(zhí)行復(fù)雜功能時(shí)（通常在24-48小時(shí)后）會(huì)變得致命。

總結(jié)： 在分離當(dāng)天，細(xì)胞依靠自身儲(chǔ)存的能量和物質(zhì)尚能維持。但在接下來的24-48小時(shí)里，它們在高鉀的脅迫下嘗試貼壁、鋪展和進(jìn)入細(xì)胞周期，這個(gè)過程極大地消耗了它們的資源，并放大了離子失衡帶來的毒性效應(yīng)，最終在第二天“突然"出現(xiàn)大面積凋亡。

當(dāng)然，原代細(xì)胞凋亡通常是多重因素疊加的結(jié)果，除了鉀離子，還需進(jìn)行系統(tǒng)性地排查和后續(xù)規(guī)劃：

1. 立即排查培養(yǎng)基和試劑

2. 排查分離操作與細(xì)胞本身

3. 規(guī)劃建議

五、總結(jié)

對于原代細(xì)胞培養(yǎng)而言，“水"的質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)成功的基石，培養(yǎng)液中鉀離子含量過高會(huì)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，必須優(yōu)先排查相關(guān)試劑，同時(shí)也不要忽略細(xì)胞分離過程和質(zhì)量本身的影響。